小鼠綠色熒光蛋白(GFP)ELISA試劑盒檢測步驟
發(fā)表時間:2024-12-10以下是小鼠綠色熒光蛋白(GFP)ELISA試劑盒的檢測步驟概述:
1、準備與平衡:將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,室溫平衡20分鐘。同時,準備好所需的酶標儀、移液器、槍頭、Eppendorf管等實驗器材。
2、設置孔板:取出所需數(shù)量的板條,設置標準品孔、樣本孔和空白孔。標準品孔加入不同濃度的標準品,樣本孔加入待測樣本和稀釋液,空白孔則不加任何物質。
3、加樣與孵育:按照說明書要求,向各孔中加入相應的試劑,并進行孵育。孵育過程中,保持恒溫并避免光照干擾。
4、洗板:使用洗滌液充分洗滌反應板,去除未結合的物質和雜質。洗滌次數(shù)和洗滌液的配制需按照說明書進行。
5、加入檢測抗體與孵育:向各孔中加入生物素化的檢測抗體,并進行孵育。孵育結束后,再次進行洗板操作。
6、加入SABC復合物與孵育:向各孔中加入SABC復合物,并進行孵育。孵育結束后,再次洗板。
7、顯色與測定:向各孔中加入TMB顯色液,避光孵育一段時間后加入終止液。在450nm波長處使用酶標儀測定各孔的OD值。
8、結果計算與判斷:根據(jù)標準品的OD值和濃度繪制標準曲線。根據(jù)樣本的OD值在標準曲線上找到對應的濃度值,再乘以稀釋倍數(shù)即可得到樣本中靶蛋白的濃度。同時,根據(jù)OD值的范圍和變化趨勢可以判斷樣本的陽性或陰性結果。
需要注意的是,實驗過程中應嚴格遵守說明書的要求和操作規(guī)程,確保實驗結果的準確性和可靠性。同時,實驗過程中還應注意安全防護措施,避免對操作者和環(huán)境造成危害。